免疫组织化学实验技术  061M5040H

学期:2017—2018学年(春)第二学期 | 课程属性:实验课 | 任课教师:王红梅,丁文军,彭景楩,赵勇
授课时间: 星期三, 第5、6、7、8节
授课地点: 学3-138
授课周次: 3、4、5、6
课程编号: 061M5040H 课时: 40 学分: 1.0
课程属性: 实验课 主讲教师:王红梅,丁文军,彭景楩,赵勇
英文名称: Experiments of Immunohistochemistry

教学目的、要求

免疫组织化学实验技术是医学基础病理学和临床病理诊断的关键技术。随着后基因组时代的来临,基因研究的重点已由结构转向功能。生命科学与医药学进一步渗透、交叉与融合。免疫组织化学技术也与现代分子生物学技术、蛋白质组学研究技术等结合,向定量化和分子水平发展,已成为生命科学领域中研究形态、功能和代谢的一种有力检测工具。本课程为微生物学、免疫学、神经生物学、发育生物学、细胞生物学、遗传学等专业研究生专业课,也可作为相关专业研究生的选修课。
通过本课程的学习,使研究生掌握现代免疫组织化学研究技术方法,为从事免疫组化及相关学科的生命科学研究奠定良好的实验技术基础。

预修课程

细胞生物学、生物化学、免疫学、微生物学、遗传学、分子生物学

教 材

主要内容

免疫组化具有特异性强、灵敏度高、定位准确,该技术已广泛应用于生物学和医学研究的许多领域。流式细胞术是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段,可高速分析大量细胞,并在同一个细胞中同时检测多个参数;与传统的荧光显微镜检查相比,具有速度快、精度高、准确性好等优点,成为当代先进的细胞定量分析技术之一。
 
本课程次将以经典免疫组化实验为基础,重点进行组织形态学与免疫组化理论讲授及实验技术培训。以流式细胞术简单技术入手,理解其原理与该技术的广泛应用。本课程将注重实用性,力图将理论与实习操作相结合,基本理论与新进展相兼顾,使学生对相关技术有一个初步认识及掌握基本实验技巧。

包括理论课程与实验课程两部分,共计40个学时。

理论课程(12个学时,每讲3学时)
免疫组化的基本理论原理与应用
免疫组化的新技术、新进展
流式细胞术的基本原理与应用
流式细胞术的新技术、新进展

实验课程(26个学时,每次实验4学时)
实验一 实验准备(2学时)
实验室规章制度
免疫组织化学实验室安全讲解
实验二 实验动物取样、固定与保存(4学时)
动物的致死法及取材
尸体解剖的取材
活检标本的取材
细胞标本的制备
实验三 组织切片与固定等准备(4学时)
组织固定:固定液的种类,固定的方法,固定的注意事项,影响固定的因素
组织的脱水、透明、浸蜡及包埋
组织切片:载玻片的处理,石蜡切片,冰冻切片,碳蜡切片
实验四 免疫组化染色(4学时)
显色系统和衬染方法的选择
对照染色设计
非特异染色
染色失败的原因及其处置方法
免疫荧光组织化学染色方法:直接法、间接法、补体法、双重免疫荧光细胞化学标记方法
实验五  显微成像及数据分析(4学时)
仪器及软件
图像采集及分析
统计学分析
灰度、平均光密度与积分光密度
操作注意事项
实验六 用于流式细胞术分析的细胞分离与染色(4学时)
流式细胞仪的介绍
细胞分离与染色方法
实验七 流式细胞仪上机操作及数据分析(4 学时,地点:动物所实验室)
流式细胞仪基本操作及注意事项
流式细胞仪数据分析

教学方式:实验室讲解,实验
考核方式:实验操作(实验结果分析等)

参考文献

(1) 倪灿荣等,免疫组织化学实验技术及应用,化学工业出版社,北京,2006年       
(2) 蔡文琴,组织化学与细胞化学,人民卫生出版社,北京,2009年
(3) 邱曙东等,组织化学与免疫组织化学,科学出版社,北京,2008年